線粒體檸檬酸(MCA）含量試劑盒紫外分光光度法說明書
紫外分光光度法 25管/24樣 50管/48樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
商品屬性：
產品名稱：線粒體檸檬酸(MCA）含量試劑盒紫外分光光度法
貨號：LZ-S01147-A
規格 : 25管/24樣 50管/48樣
測試方法:紫外分光光度法
產品分類：三羧酸循環系列
發貨地：上海
測定意義:
CA是線粒體三羧酸循環的個中間產物，由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成，其含量是三羧酸循環強度的主要指標之一。
配合測定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量，其中（1）丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進行程度，（2）綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況，（3）乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量變化可以反映三羧酸循環進行狀況。
測定原理:
CA在檸檬酸裂解酶的作用下，生成α-酮酸（草酰乙酸）；在弱酸性條件下，α-酮酸進一步與苯肼反應，生成相應的α-酮酸苯腙；α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰，該波長下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。
自備儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液槍、1mL石英比色皿、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制:
酸性提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
堿性提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 15mL 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃
保存。
標準品：液體 1mL×1 支，10μmol/mL 檸檬酸標準液，4℃保存。
線粒體中檸檬酸提取：
稱 0.05~0.1g 樣品（建議稱 0.1g 樣本），加入 0.5mL 酸性提取液，冰上充分研磨，600g/min 4℃
離心 5min；取上清至另一 EP 管中，11000g/min 4℃離心 10min，棄上清（取 300μL 該上清液和 300μL 堿性提取液中和后可用于細胞質 CA 含量測定）；沉淀即線粒體，向沉淀中加入 0.5mL 酸性提取液，充分懸浮溶解，超聲波破碎（功率 20％，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復 30 次），取此溶液 300μL 和 300μL 堿性提取液中和，混勻，置冰上待測（不可用于蛋白質含量測定）。
生化檢測試劑盒操作步驟：
一、?準備工具和環境?：確保操作臺面干凈、整潔，這是進行科學實驗的步。南京
?二、?仔細閱讀說明書?：這是使用試劑盒的基礎，說明書包含了所有必要的信息和操作指南。
三、樣本采集?：按照說明書的指導，正確采集樣本。不同類型的檢測可能需要不同類型的樣本，如血液、唾液或鼻涕等。
?四、樣本混合?：將樣本與試劑小心混合，注意輕柔操作，避免產生泡沫，以確保檢測的準確性。
?五、?等待反應?：混合后，耐心等待試劑盒的反應，這個時間可以用來進行其他活動，但不要著急，因為好的結果值得等待。
六、結果判讀?：時間到后，仔細判讀結果。試劑盒通常會有明確的指示，告訴你如何根據顯示的線條或顏色來判斷結果。
公司正在出售的產品：
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注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。
